体视荧光显微镜的常规使用方法

更新时间：2026-06-08

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体视荧光显微镜是结合‌体视显微技术与荧光成像‌的光学仪器，兼具体视显微镜的三维立体观察能力和荧光显微镜的特异性标记成像能力，在科研和工业领域应用广泛。

核心组件分为三部分：

‌荧光滤色片组‌：由激发滤光片、分光镜和发射滤光片组成，用于筛选特定波长的激发光与发射光，减少杂光干扰。

‌光学成像组件‌：包含物镜、变倍器和目镜，总放大倍数可达到1000倍以上。

‌成像系统‌：多采用CCD/CMOS相机采集图像，现代机型通常配套专业分析软件，支持三维重建、荧光强度测量、图像拼接等功能。

开机与设备准备：

取下防尘罩，按下调焦立柱上的电源开关，若只需明场观察无需开启荧光光源，若需荧光观察需额外开启荧光光源激发器开关。

开启荧光光源后需要等待‌5~15分钟预热‌，待光源发光强度稳定后再开始观察，点燃紫外灯后15分钟内不得关闭，关闭后3分钟内不得再启动。

根据实验需求切换到对应荧光滤色片组，比如观测GFP绿色荧光蛋白需将转盘拨到对应GFP通道，调整对应的激发/发射滤光参数。

样本放置与对焦：

将预处理好的样本放在载物台中心，调整至物镜正下方；如果样本需要固定，可借助橡皮泥压平保证观察面平整。

优先使用‌低倍物镜‌找到样本目标区域，再切换到高倍物镜，先粗调焦再微调焦，直到图像清晰；如果使用油镜观察，需要在玻片上加无荧光油，低倍镜观察无需添加。

调节双目目镜瞳距，调整屈光度环，保证双眼都能观察到清晰物像，避免视疲劳。

根据观察需求调节光源强度，适配落射光/透射光切换，保证荧光亮度适中。

荧光观察与注意事项：

先在普通光源下定位目标，再切换到荧光模式观察，避免样本长时间暴露在紫外光下导致荧光猝灭——FITC标记物在紫外下照射30秒，荧光亮度就会降低50%。

单次观察时间建议控制在‌1~2小时以内‌，超过90分钟汞灯发光强度会下降，荧光也会明显减弱，最长不要超过3小时。

观察过程中如果长时间不观测，可临时关闭荧光快门，延长光源寿命、保护样本荧光。

如果需要记录结果，需要及时完成摄影采集，建议使用ASA200以上的高速感光胶片或高灵敏度相机，避免荧光猝灭后无法成像。

关机与整理：

图像采集完成后，先关闭图像采集软件，再关闭设备电源，遵循「先关软件、后关电源」的顺序，避免影响仪器参数设置。

将放大倍数调至最低，降低物镜高度，取下样本清理载物台，给仪器罩上防尘罩，完成使用登记。

如果是更换了新的汞灯灯泡，需要从开始使用就记录使用时间，方便预估使用寿命及时更换。

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